ARK-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423197

Panoramica

Aurkb (ARK-2) codifica una chinasi serina/treonina che funge da nucleo catalitico del complesso “chromosome passenger”, coordinando la condensazione dei cromosomi, la correzione degli errori di attacco tra cinetocoro e microtubuli e la citocinesi. L’attività di ARK-2 è regolata durante la mitosi tramite segnali dipendenti dalla fosforilazione e mediante una rilocalizzazione spaziale dai centromeri alla zona mediana del fuso, collegando il soddisfacimento dello spindle assembly checkpoint a una corretta segregazione cromosomica. L’alterazione di Aurkb perturba la dinamica della cromatina e la formazione dell’anello contrattile, portando ad aneuploidia e alla formazione di micronuclei, processi spesso sfruttati per studiare l’instabilità genomica. Un segnale AURKB alterato è stato implicato in fenotipi proliferativi e nell’instabilità cromosomica associata ai tumori, rendendolo un nodo comune nella ricerca sul ciclo cellulare e sulla fedeltà della mitosi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ARK-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aurkb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aurkb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aurkb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ARK-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aurkb per lo studio della segnalazione di ARK-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aurkb critici per la funzione di ARK-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aurkb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ARK-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ARK-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aurkb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ARK-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ARK-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aurkb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aurkb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.