ArgBP2 Double Nickase Plasmid (h): sc-405716-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ArgBP2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ArgBP2 Double-Nickase-Plasmid (h) und ArgBP2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SORBS2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ArgBP2: sc-514671
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ArgBP2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405716-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ArgBP2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405716-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SORBS2 kodiert ArgBP2, ein Adapterprotein, das in quergestreifter Muskulatur und anderen mechanisch aktiven Geweben angereichert ist und den Umbau des Aktin-Zytoskeletts mit der Signaltransduktion koppelt. ArgBP2 enthält SH3-Domänen, die prolinreiche Interaktionspartner als Gerüst binden, und integriert Signale von Kinasen und Adhäsionskomplexen, um die Organisation von Stressfasern, die Dynamik fokaler Adhäsionen und die sarkomerische Architektur zu regulieren. Über Wechselwirkungen mit Zytoskelett-Regulatoren und Signalkomponenten der Abl-Familie trägt SORBS2 zu Signalwegen bei, die Zellform, Migration und kontraktile Funktion steuern. Eine veränderte SORBS2-Expression oder Netzwerk-Konnektivität wurde mit kardialen und muskulären Phänotypen in Verbindung gebracht und wird im Kontext kardiomyopathieassoziierter Remodeling-Prozesse und zytoskelettaler Dysregulation untersucht.
ArgBP2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SORBS2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SORBS2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SORBS2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SORBS2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.