Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
ANKTM1 Plasmide Double Nickase (m): sc-435491-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ANKTM1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ANKTM1 Double Nickase Plasmid (m) e il ANKTM1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Trpa1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ANKTM1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-435491-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene Trpa1 nel topo codifica ANKTM1 (TRPA1), un canale cationico polimodale e non selettivo della famiglia dei recettori a potenziale transitorio (TRP) che integra irritanti elettrofili, specie reattive dell’ossigeno/dell’azoto e mediatori infiammatori per regolare l’eccitabilità dei neuroni sensoriali. L’attivazione del canale induce un afflusso di calcio e una segnalazione a valle che modella la nocicezione, l’infiammazione neurogena e le risposte delle vie aeree e vascolari, collegando TRPA1 a processi quali il rilevamento dello stress ossidativo e l’apertura del canale modulata da GPCR e chinasi. L’attività di TRPA1 interseca le vie infiammatorie attraverso il rilascio di mediatori e il crosstalk neurone–sistema immunitario, influenzando fenotipi di ipersensibilità al dolore e di prurito in modelli preclinici. Una segnalazione di TRPA1 deregolata è stata associata a stati di dolore infiammatorio, a meccanismi di dolore neuropatico, a tosse e iperreattività delle vie aeree di tipo asmatico, e all’elaborazione sensoriale legata all’emicrania, a supporto della sua ampia rilevanza nella ricerca in neurobiologia e immunofisiologia.
ANKTM1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Trpa1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Trpa1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Trpa1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Trpa1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.