Amylase 2a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400533

Panoramica

AMY2A codifica l’α-amilasi pancreatica 2A, un’idrolasi secreta che avvia la degradazione dell’amido e del glicogeno alimentari scindendo i legami glicosidici α-1,4 per generare maltosio e oligosaccaridi. Nell’ambito del programma enzimatico del pancreas esocrino, l’Amilasi 2a contribuisce al metabolismo digestivo ed è regolata nei processi di differenziamento delle cellule acinose e della via secretoria, inclusi il traffico RE/Golgi e il rilascio enzimatico accoppiato allo stimolo. Alterazioni dell’espressione o dell’attività dell’amilasi sono utilizzate come indicatore molecolare della funzione esocrina pancreatica e vengono spesso esaminate in contesti di infiammazione pancreatica e di patologie pancreatiche in cui l’omeostasi delle cellule acinose è compromessa. AMY2A funge inoltre da marcatore negli studi sull’identità delle cellule acinose, sulle risposte allo stress e sulla regolazione dei geni degli enzimi digestivi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Amylase 2a (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AMY2A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AMY2A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AMY2A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Amylase 2a.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AMY2A per lo studio della segnalazione di Amylase 2a, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AMY2A critici per la funzione di Amylase 2a
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AMY2A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Amylase 2a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Amylase 2a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AMY2A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Amylase 2a Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Amylase 2a (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AMY2A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AMY2A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.