Amphiregulin Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400987-LAC

AREG codifica per l’amfiregulina, un ligando secreto del recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR/ErbB1) prodotto da cellule epiteliali, fibroblasti e da diversi sottotipi immunitari in risposta a lesioni e a segnali infiammatori. In seguito al legame con EGFR, l’amfiregulina promuove la dimerizzazione del recettore e attiva le vie di segnalazione a valle MAPK/ERK, PI3K/AKT e JAK/STAT, coordinando proliferazione cellulare, sopravvivenza e rimodellamento tissutale. L’espressione di AREG è comunemente indotta da programmi trascrizionali responsivi a citochine e stress e contribuisce alla segnalazione paracrina all’interno dei microambienti locali. Un’alterata regolazione della segnalazione amfiregulina–EGFR è stata collegata a infiammazione patologica, fibrosi e processi oncogenici, rendendo AREG un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sul crosstalk epitelio–stroma e sulla regolazione del microambiente.

Le particelle di attivazione lentivirale Amphiregulin (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di AREG in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Amphiregulin (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione AREG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Amphiregulin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo AREG e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.