Amphiphysin II Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401263

Panoramica

BIN1 codifica l’anfifisina II, una proteina con dominio BAR in grado di riconoscere la curvatura di membrana, che coordina l’endocitosi mediata da clatrina, la biogenesi dei tubuli T e il rimodellamento delle membrane attraverso interazioni con la dinamina, i fosfoinositidi e il citoscheletro di actina. Nelle cellule umane, BIN1 contribuisce all’omeostasi del traffico e della segnalazione accoppiando la scissione delle vescicole all’organizzazione del citoscheletro, con funzioni specifiche di isoforma nei contesti muscolare e del sistema nervoso. Alterazioni genetiche e di espressione di BIN1 sono state associate a miopatie, inclusa la miopatia centronucleare, ed è inoltre implicato in vie legate alla neurodegenerazione, come il traffico endosomiale e processi associati all’amiloide rilevanti per la malattia di Alzheimer. Questi ruoli rendono l’anfifisina II un nodo utile per studiare la dinamica delle membrane, la biologia sinaptica e l’architettura delle cellule muscolari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Amphiphysin II (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BIN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BIN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BIN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Amphiphysin II.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BIN1 per lo studio della segnalazione di Amphiphysin II, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BIN1 critici per la funzione di Amphiphysin II
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BIN1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Amphiphysin II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Amphiphysin II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BIN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Amphiphysin II Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Amphiphysin II (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BIN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BIN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.