ALR Plasmide Double Nickase (h): sc-403367-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ALR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ALR Double Nickase Plasmid (h) e il ALR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GFER. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ALR Antibody (E-7): sc-365885
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ALR Plasmide Double Nickase (h) | sc-403367-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ALR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403367-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **GFER** codifica l’**augmenter of liver regeneration (ALR)**, una ossidasi dei gruppi sulfidrilici che si localizza principalmente nello spazio intermembrana mitocondriale e supporta il ripiegamento ossidativo delle proteine tramite il relay disolfuro **MIA40–GFER**. Favorendo l’importazione e la maturazione di proteine mitocondriali ricche di cisteina, ALR contribuisce al mantenimento della catena respiratoria, all’omeostasi redox e all’integrità mitocondriale, influenzando il metabolismo energetico e le risposte allo stress. L’attività di GFER interseca la regolazione dell’apoptosi e la proliferazione cellulare attraverso la segnalazione mitocondriale e la gestione delle specie reattive dell’ossigeno. La deregolazione di ALR/GFER è stata associata a fenotipi di disfunzione mitocondriale ed è frequentemente studiata in ambiti quali la biologia epatica, il neurosviluppo e i disturbi legati a una proteostasi compromessa e a uno squilibrio redox.
ALR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GFER nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GFER. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GFER. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GFER interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.