Aldehyde dehydrogenase 1B1/ALDH1B1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404562-NIC

ALDH1B1 umano codifica un’aldeide deidrogenasi mitocondriale che ossida un’ampia gamma di aldeidi endogene e xenobiotiche nei corrispondenti acidi carbossilici utilizzando NAD(P)+, contribuendo al mantenimento dell’equilibrio redox cellulare e alla detossificazione delle aldeidi. Limitando l’accumulo di aldeidi reattive generate durante la perossidazione lipidica e il metabolismo intermedio, ALDH1B1 favorisce l’omeostasi mitocondriale e la protezione dallo stress carbonilico. La sua attività si interseca con la gestione di etanolo/acetaldeide, con il metabolismo delle aldeidi correlate ai retinoidi e con le vie di risposta allo stress ossidativo che influenzano proliferazione, differenziamento e adattamento metabolico. Alterazioni dell’espressione di ALDH1B1 e dei programmi enzimatici delle ALDH sono state associate alla biologia tumorale e a fenotipi metabolici, spingendo a indagini funzionali in modelli di cancro, infiammazione e disfunzione mitocondriale.

Aldehyde dehydrogenase 1B1/ALDH1B1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ALDH1B1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ALDH1B1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ALDH1B1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ALDH1B1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.