Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Plasmide Double Nickase (h): sc-401630-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Double Nickase Plasmid (h) e il Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ALDH1A3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401630-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401630-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALDH1A3 umano codifica l’aldeide deidrogenasi citosolica 1-A3, un enzima NAD(P)+-dipendente che ossida una gamma di aldeidi reattive e contribuisce alla biosintesi dell’acido retinoico attraverso il metabolismo del retinaldeide. Regolando la detossificazione delle aldeidi e la segnalazione dei retinoidi, ALDH1A3 influenza l’equilibrio redox cellulare, i programmi di differenziamento e le reti trascrizionali responsivi all’acido retinoico. Un’espressione alterata di ALDH1A3 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è spesso utilizzata come marcatore associato allo stato di lineage e al metabolismo delle aldeidi, motivando studi meccanicistici su come questo enzima plasmi fenotipi proliferativi e di adattamento allo stress. Queste funzioni collegano ALDH1A3 a vie che regolano la gestione dello stress ossidativo, la riprogrammazione metabolica e la regolazione genica dello sviluppo.
Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ALDH1A3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ALDH1A3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ALDH1A3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ALDH1A3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.