Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401630-ACT

L’ALDH1A3 umano codifica l’aldeide deidrogenasi 1-A3, un enzima NAD(P)+-dipendente che ossida il retinaldeide ad acido retinoico, un morfogeno chiave che regola programmi trascrizionali deputati al controllo della differenziazione, della proliferazione e dell’identità delle cellule epiteliali. Attraverso il metabolismo dei retinoidi e le reti di regolazione genica associate, ALDH1A3 influenza l’equilibrio redox cellulare e l’adattamento metabolico, collegando la detossificazione delle aldeidi ai percorsi dello sviluppo e dell’omeostasi tissutale. Un’espressione deregolata di ALDH1A3 è stata riportata in molteplici contesti oncologici ed è frequentemente studiata in relazione alla plasticità delle cellule tumorali, all’invasività e ai fenotipi di risposta ai farmaci. Il gene è inoltre oggetto di studio in biologia oculare e neurale per via del suo ruolo nella biosintesi dell’acido retinoico e nel patterning regionale.

Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ALDH1A3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ALDH1A3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ALDH1A3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ALDH1A3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 nelle cellule tumorali con espressione di ALDH1A3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.