Adh1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419005

Panoramica

Adh1 codifica l’alcol deidrogenasi 1, un ossidoreduttasi citosolica che catalizza l’interconversione, dipendente da NAD+/NADH, di alcoli e aldeidi a catena corta, contribuendo all’equilibrio redox cellulare e al metabolismo intermedio. Nei tessuti murini, l’attività di ADH1 supporta il metabolismo di alcol e xenobiotici e si integra con vie che controllano la detossificazione delle aldeidi, le risposte allo stress ossidativo e l’omeostasi di lipidi e composti carbonilici. Alterazioni nella gestione di alcoli/aldeidi sono rilevanti in modelli di danno epatico, infiammazione e disfunzione metabolica, in cui rapporti NADH/NAD+ modificati e l’accumulo di aldeidi reattive possono influenzare la funzione mitocondriale e la segnalazione. In quanto enzima metabolico con ampia specificità di substrato, Adh1 è spesso analizzato in studi sulla capacità di detossificazione e sull’adattamento metabolico specifico di tessuto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Adh1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adh1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adh1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adh1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Adh1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adh1 per lo studio della segnalazione di Adh1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adh1 critici per la funzione di Adh1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adh1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Adh1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Adh1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adh1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Adh1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Adh1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adh1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adh1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.