ADHγ Plasmide Double Nickase (h): sc-402261-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADHγ Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADHγ Double Nickase Plasmid (h) e il ADHγ Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADH1C. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADHγ Plasmide Double Nickase (h) | sc-402261-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADHγ Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402261-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADH1C codifica l’alcol deidrogenasi gamma umana (ADHγ), un’ossidoreduttasi citosolica zinco‑dipendente che catalizza l’ossidazione dell’etanolo e di altri alcoli alifatici nei rispettivi aldeidi in modo dipendente da NAD⁺. Come parte del cluster genico delle ADH, ADHγ contribuisce al metabolismo epatico e gastrointestinale degli xenobiotici e influenza l’equilibrio redox cellulare attraverso la produzione di NADH. Varianti o una regolazione alterata di ADH1C possono modulare l’esposizione all’acetaldeide e, di conseguenza, lo stress ossidativo e le vie a valle di detossificazione degli aldeidi, collegando questo enzima a fenotipi di suscettibilità nel danno tissutale correlato all’alcol e in una più ampia disregolazione metabolica. ADH1C è inoltre utilizzato come marcatore funzionale in studi sulla differenziazione degli epatociti, sul metabolismo epatico e sulla cinetica enzimatica tra le diverse isoforme di ADH.
ADHγ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADH1C nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADH1C. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADH1C. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADH1C interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.