Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400407-ACT

Il gene umano **ADCY3** codifica l’adenilato ciclasi 3 (AC3), un enzima associato alla membrana che converte l’ATP in cAMP a valle della segnalazione mediata dai GPCR. Modellando la segnalazione dipendente da cAMP/PKA ed EPAC, AC3 influenza programmi trascrizionali, l’attività dei canali ionici e il metabolismo cellulare, con ruoli di rilievo nelle vie chemosensoriali e nella segnalazione neuronale. Alterazioni dell’espressione o della funzione di ADCY3 sono state collegate a fenotipi metabolici, inclusi tratti associati all’obesità e una regolazione anomala dell’omeostasi energetica; inoltre, il gene è studiato anche in contesti in cui la segnalazione del cAMP influisce su infiammazione e regolazione endocrina. In quanto regolatore nodale della dinamica dei secondi messaggeri, ADCY3 rappresenta un bersaglio utile per analizzare le risposte del cAMP dipendenti dallo stimolo e il cross-talk tra vie di segnalazione.

Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADCY3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADCY3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADCY3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADCY3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 nelle cellule tumorali con espressione di ADCY3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.