Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402994-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 Double Nickase Plasmid (h) e il Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADCY2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 Antibody (F-7): sc-514938
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402994-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402994-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ADCY2 umano codifica l’adenilato ciclasi 2 (AC2), un enzima associato alla membrana che converte l’ATP in AMP ciclico (cAMP) a valle dell’attivazione dei recettori accoppiati a proteine G (GPCR). Modulando la dinamica del cAMP, AC2 regola la segnalazione mediata dalla proteina chinasi A (PKA) e da EPAC, influenzando l’attività dei canali ionici, il rilascio di neurotrasmettitori e la trascrizione genica dipendente dallo stimolo tramite CREB. L’attività di ADCY2 si integra con le vie GPCR–Gαs/Gαi e contribuisce a decisioni cellulari legate a eccitabilità, metabolismo e adattamento del segnale. Alterazioni genetiche e della segnalazione che compromettono l’omeostasi del cAMP sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e cardiometabolici, rendendo ADCY2 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici delle reti di segnalazione guidate dai GPCR.
Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADCY2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADCY2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADCY2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADCY2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.