ADAR2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401166-ACT

Il gene umano **ADARB1** codifica **ADAR2**, una adenosina deaminasi che agisce sull’RNA e catalizza l’editing dell’RNA da A a I in modo sito-selettivo all’interno di strutture di RNA a doppio filamento. Questa modifica post-trascrizionale può ricodificare i codoni, alterare i siti di splicing e modulare la stabilità dell’RNA, plasmando così l’eccitabilità neuronale e la segnalazione sinaptica attraverso l’editing di trascritti associati alla neurotrasmissione. L’attività di ADAR2 interagisce con le vie dell’immunità innata di rilevamento dell’RNA riducendo l’immunogenicità del dsRNA endogeno e influenzando i programmi dei geni stimolati dall’interferone. Pattern deregolati di editing dell’RNA che coinvolgono ADAR2 sono stati collegati a fenotipi neurologici e del neurosviluppo e vengono studiati come contributori molecolari al rimodellamento del trascrittoma associato alle malattie.

ADAR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADARB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ADAR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADARB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADARB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ADAR2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADARB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ADAR2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ADAR2 nelle cellule tumorali con espressione di ADARB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.