ADAM12 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402583-ACT

ADAM12 codifica una metalloproteasi-disintegrina ancorata alla membrana (ADAM12) che regola le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice attraverso lo shedding dell’ectodominio di proteine di superficie e la modulazione della segnalazione mediata dall’adesione. Partecipa a processi che includono il rimodellamento della matrice extracellulare, la miogenesi e il crosstalk della segnalazione dei fattori di crescita, influenzando vie come EGFR/ERBB e l’attività della rete TGF-β tramite il processamento proteolitico di substrati associati alla membrana. L’espressione e l’attività di ADAM12 sono state collegate ad alterazioni dei programmi cellulari di migrazione, invasione e differenziamento in contesti di fibrosi e biologia del cancro. Queste proprietà rendono ADAM12 un bersaglio utile per studiare la segnalazione dipendente da proteasi, il rimodellamento stromale e i meccanismi di sviluppo tissutale in modelli cellulari umani.

ADAM12 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADAM12 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ADAM12 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADAM12 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADAM12, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ADAM12. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADAM12 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ADAM12 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ADAM12 nelle cellule tumorali con espressione di ADAM12 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.