ADAM10 Plasmide Double Nickase (h): sc-400883-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADAM10 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADAM10 Double Nickase Plasmid (h) e il ADAM10 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADAM10. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ADAM10 Antibody (B-3): sc-28358
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADAM10 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400883-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADAM10 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400883-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADAM10 codifica una metalloproteasi transmembrana zinco-dipendente della famiglia ADAM che media lo “shedding” dell’ectodominio di molteplici proteine di superficie cellulare, rimodellando così la disponibilità dei recettori e la comunicazione cellula-cellula. ADAM10 partecipa alla proteolisi intramembrana regolata e influenza la segnalazione di Notch, la processazione di APP e il clivaggio di molecole di adesione e immunomodulatrici come caderine, ligandi e recettori per citochine. Attraverso queste attività, incide sullo sviluppo neuronale, sulla funzione sinaptica, sulla biologia della barriera epiteliale e sulle risposte immunitarie, integrando segnali all’interno di reti di segnalazione prossime alla membrana. Un’attività o un’espressione disregolata di ADAM10 è stata implicata nella segnalazione associata al cancro e in fenotipi di invasione, in meccanismi neurodegenerativi legati al metabolismo di APP e nella fisiopatologia dell’infiammazione, a sostegno del suo valore come bersaglio meccanicistico negli studi di via di segnalazione.
ADAM10 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADAM10 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADAM10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADAM10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADAM10 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.