ACTR-IIA Plasmide Double Nickase (h): sc-402524-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ACTR-IIA Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ACTR-IIA Double Nickase Plasmid (h) e il ACTR-IIA Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ACVR2A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ACTR-IIA Antibody (D-9): sc-515826
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ACTR-IIA Plasmide Double Nickase (h) | sc-402524-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACTR-IIA Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402524-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACVR2A codifica il recettore dell’activina di tipo IIA (ACTR-IIA), un recettore transmembrana con attività chinasica serina/treonina che lega le activine e ligandi correlati della superfamiglia del TGF-β per avviare la segnalazione mediata da SMAD2/3. Attraverso la formazione di complessi recettoriali con i recettori di tipo I, ACTR-IIA regola programmi trascrizionali che controllano proliferazione cellulare, differenziamento, apoptosi, dinamiche epitelio-mesenchimali e omeostasi della matrice extracellulare. La segnalazione dipendente da ACVR2A contribuisce allo sviluppo dei tessuti e alla regolazione immunitaria e infiammatoria, e le alterazioni della via sono spesso studiate nel contesto di una deregolazione della segnalazione TGF-β/activina. Alterazioni genetiche e della segnalazione che coinvolgono ACVR2A sono state riportate in molteplici contesti associati a patologie, inclusi tumori e disturbi gastrointestinali, a supporto del suo valore come nodo per l’analisi meccanicistica delle vie di segnalazione.
ACTR-IIA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACVR2A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACVR2A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACVR2A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACVR2A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.