ACSL4 Particelle di Attivazione Lentivirale (m2): sc-424503-LAC-2

Il gene murino Acsl4 codifica l’acil-CoA sintetasi 4 della famiglia a catena lunga (ACSL4), un enzima del metabolismo lipidico che attiva acidi grassi polinsaturi a catena lunga, come l’acido arachidonico, convertendoli in acil-CoA, contribuendo così a modellare la composizione dei fosfolipidi di membrana e la successiva biosintesi degli eicosanoidi. ACSL4 agisce all’intersezione tra l’assorbimento degli acidi grassi, il rimodellamento dei fosfolipidi e l’omeostasi redox, ed è ampiamente utilizzato come determinante molecolare della sensibilità alla ferroptosi grazie al suo ruolo nella generazione di fosfolipidi contenenti PUFA ossidabili. Un’alterata attività di ACSL4 è stata collegata a una deregolazione della segnalazione lipidica e delle risposte allo stress ossidativo in modelli di neurodegenerazione, disfunzione metabolica, infiammazione e vie rilevanti per il cancro. L’editing genico mirato di Acsl4 consente studi meccanicistici sul flusso lipidico, sulla morte cellulare ferroptotica e sul rimodellamento di membrana in diversi tipi cellulari e in sistemi murini in vivo.

Le particelle di attivazione lentivirale ACSL4 (m2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Acsl4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ACSL4 (m2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Acsl4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ACSL4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Acsl4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.