ABCG8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402453-ACT

ABCG8はATP結合カセット（ABC）型のハーフトランスポーターをコードしており、ABCG5とヘテロ二量体を形成して、小腸上皮細胞の頂端膜および肝細胞の胆管側膜に存在する機能的なステロール排出ポンプとして働きます。この複合体は腸管での吸収を制限し、食事由来ステロールの胆汁中排泄を促進することで、協調した輸送・脂質処理経路を介して全身のコレステロールおよび植物ステロールの恒常性を形作ります。ABCG8活性が障害されるとステロール輸送が乱れ、血漿ステロールプロファイルの異常や、シトステロール血症様の症状を含む遺伝性のステロール蓄積表現型と関連します。そのためABCG8は、代謝調節、脂質輸送の生物学、ならびにステロール代謝における遺伝子型—表現型の関係を理解する上で広く研究されています。

ABCG8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCG8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ABCG8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCG8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCG8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ABCG8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCG8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるABCG8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCG8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるABCG8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。