ABCA4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401830-ACT

ABCA4は、主に網膜の視細胞で発現するATP結合カセット（ABC）トランスポーターをコードしており、視細胞外節のディスク膜に局在して視覚サイクルに関与します。ABCA4はレチノイド抱合体のATP依存的輸送を担い、N-レチニリデン-ホスファチジルエタノールアミン（N-retinylidene-phosphatidylethanolamine）および関連中間体の除去を助けることで、A2Eなどの細胞毒性をもつビスレチノイドの蓄積を抑えます。レチノイドの取り扱いにおけるこの役割を通じて、ABCA4は視細胞の恒常性を支え、脂質輸送、酸化ストレス、ならびに網膜色素上皮（RPE）—視細胞相互作用を制御する経路とも関連します。ABCA4の制御異常や活性低下は、スターガルト病やABCA4関連錐体杆体ジストロフィーを含む遺伝性網膜変性と強く関連しており、網膜病態生物学の機序解明における重要な標的となっています。

ABCA4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCA4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ABCA4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCA4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCA4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ABCA4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCA4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるABCA4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCA4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるABCA4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。