5-LO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419091
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- 5-LO O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico 5-LO, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:5-LO Anticorpo (33): sc-136195
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
5-LO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419091 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Alox5 codifica a 5-lipoxigenase (5-LO), uma dioxigenase de ferro não heme que catalisa as primeiras etapas comprometidas da biossíntese de leucotrienos a partir do ácido araquidônico. A atividade da 5-LO, coordenada com a FLAP e com as sintases a jusante, impulsiona a produção de LTB4 e de leucotrienos cisteinílicos que regulam a quimiotaxia de leucócitos, a permeabilidade vascular e o tônus brônquico. Essa via se cruza com a sinalização da imunidade inata e com redes de mediadores lipídicos inflamatórios, influenciando a função de macrófagos e neutrófilos, bem como o equilíbrio de eicosanoides. A desregulação da sinalização Alox5/5-LO tem sido associada a fenótipos inflamatórios das vias aéreas e alérgicos, inflamação aterosclerótica e remodelamento do microambiente tumoral em modelos murinos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO 5-LO (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Alox5 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Alox5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Alox5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína 5-LO.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Alox5 para a investigação da sinalização de 5-LO, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Alox5 críticos para a função 5-LO
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Alox5 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo 5-LO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo 5-LO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Alox5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo 5-LO Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR 5-LO (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Alox5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Alox5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.