κ-casein Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406821

Panoramica

CSN3 codifica la κ-caseina, una fosfoproteina secreta classicamente descritta come componente delle micelle di caseina del latte, dove contribuisce alla solubilità delle proteine e all’organizzazione del fosfato di calcio. In quanto glicoproteina extracellulare, la κ-caseina va incontro a modifiche post-traduzionali che influenzano le interazioni proteina–proteina e le dinamiche di secrezione, rendendola un substrato modello per lo studio della processazione nella via secretoria e del clivaggio proteolitico. Sebbene la biologia di CSN3 sia definita soprattutto in contesti legati alla lattazione, variazioni nella sequenza e nella glicosilazione della κ-caseina sono state associate a cambiamenti nella stabilità della proteina e nella generazione di peptidi bioattivi, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla processazione e sulla segnalazione delle proteine extracellulari. Nei sistemi umani, CSN3 rappresenta un locus trattabile per indagare la regolazione dell’espressione delle proteine secrete e gli effetti a valle dei peptidi derivati dalla proteolisi sulle risposte cellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO κ-casein (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CSN3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CSN3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CSN3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina κ-casein.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CSN3 per lo studio della segnalazione di κ-casein, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CSN3 critici per la funzione di κ-casein
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CSN3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal κ-casein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal κ-casein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CSN3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal κ-casein Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR κ-casein (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CSN3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CSN3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.