δ-catenin Plasmide Double Nickase (h): sc-402493-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- δ-catenin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il δ-catenin Double Nickase Plasmid (h) e il δ-catenin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CTNND2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: δ-catenin Antibody (40.1): sc-81793
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
δ-catenin Plasmide Double Nickase (h) | sc-402493-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
δ-catenin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402493-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CTNND2 codifica la δ-catenina umana (membro della famiglia p120-catenina), un adattatore citoplasmatico arricchito nelle giunzioni aderenti, dove modula la stabilità del complesso cadherina–catenina e collega l’adesione cellula-cellula alla dinamica del citoscheletro di actina. La δ-catenina partecipa a vie di segnalazione che regolano la crescita dei neuriti, l’organizzazione sinaptica e la motilità cellulare, in parte tramite interazioni con regolatori delle GTPasi della famiglia Rho e proteine di impalcatura (scaffold) giunzionali. Un’alterata espressione di CTNND2 o la sua perturbazione genomica è stata associata a fenotipi del neurosviluppo ed è stata inoltre studiata in contesti di plasticità epiteliale e biologia tumorale, in cui il rimodellamento dell’adesione è un processo chiave. Queste caratteristiche rendono CTNND2 un bersaglio utile per studiare la segnalazione a livello delle giunzioni, la morfogenesi neuronale e i meccanismi che accoppiano l’adesione a programmi trascrizionali e del citoscheletro.
δ-catenin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CTNND2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CTNND2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CTNND2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CTNND2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.