β2-Adaptin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-428053

Panoramica

Ap2b1 codifica la subunità β2-adattina del complesso adattatore AP-2, un componente centrale dell’endocitosi mediata da clatrina nelle cellule di topo. La β2-adattina contribuisce ad accoppiare la selezione del carico alla membrana plasmatica con l’assemblaggio del rivestimento di clatrina, coordinando l’internalizzazione e il riciclo di recettori, trasportatori e complessi di segnalazione. Attraverso queste funzioni, AP-2 influenza vie dipendenti dal traffico di membrana, come la segnalazione delle tirosin-chinasi recettoriali, il ciclo delle vescicole sinaptiche e la dinamica del citoscheletro. L’alterazione del traffico mediato da AP-2 è ampiamente rilevante per studi di neurobiologia, metabolismo e reti di segnalazione oncogeniche, in cui cambiamenti nel turnover recettoriale e nello smistamento endosomiale possono rimodellare le risposte dello stato cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β2-Adaptin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ap2b1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ap2b1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ap2b1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β2-Adaptin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ap2b1 per lo studio della segnalazione di β2-Adaptin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ap2b1 critici per la funzione di β2-Adaptin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ap2b1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β2-Adaptin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal β2-Adaptin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ap2b1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β2-Adaptin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR β2-Adaptin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ap2b1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ap2b1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.