α2A-AR Plasmide Double Nickase (m): sc-419023-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- α2A-AR Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il α2A-AR Double Nickase Plasmid (m) e il α2A-AR Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Adra2a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
α2A-AR Plasmide Double Nickase (m) | sc-419023-NIC | 20 µg | $410.00 |
Adra2a codifica il recettore adrenergico α2A del topo (α2A-AR), un GPCR accoppiato a Gi/o che modula il rilascio di neurotrasmettitori e il tono simpatico inibendo l’adenilil ciclasi, riducendo il cAMP e regolando l’attività dei canali ionici. La segnalazione dell’α2A-AR influisce sulla regolazione del feedback presinaptico della trasmissione catecolaminergica, con effetti a valle sulle vie dipendenti dalla PKA e sull’eccitabilità neuronale. Nei tessuti periferici, questo recettore partecipa alla regolazione autonoma del tono vascolare e dell’omeostasi metabolica attraverso il controllo dei secondi messaggeri mediato da GPCR. La disregolazione della segnalazione adrenergica che coinvolge ADRA2A è stata studiata in modelli murini in relazione a fenotipi neurocomportamentali, responsività allo stress e vie associate a tratti cardiometabolici.
α2A-AR Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Adra2a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Adra2a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Adra2a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Adra2a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.