Plásmido CRISPR de Activación (m) ZPR1: sc-423774-ACT

ZPR1 (proteína de dedos de zinc ZPR1) es una proteína conservada evolutivamente, de unión a ARN y que contiene dedos de zinc, implicada en el control transcripcional, el metabolismo del ARN y la señalización sensible a factores de crecimiento. En células de ratón, ZPR1 participa en el tráfico núcleo–citoplasma y se asocia con complejos de procesamiento de ARN, conectando señales mitogénicas con programas de expresión génica que sostienen la proliferación y las respuestas al estrés celular. Estudios funcionales vinculan ZPR1 con la biología de las neuronas motoras y con vías relevantes para la atrofia muscular espinal a través de su relación con el ensamblaje de ribonucleoproteínas asociadas a SMN y con la dinámica del empalme (splicing) del ARN. Por ello, la desregulación de las redes reguladoras de ARN dependientes de ZPR1 resulta de interés para modelar la neurodegeneración y para estudios mecanísticos del acoplamiento entre la transcripción y el procesamiento del ARN.

ZPR1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Zpr1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZPR1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Zpr1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Zpr1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZPR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Zpr1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZPR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZPR1 en células tumorales con expresión de Zpr1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.