ZNF395 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403829-ACT

ZNF395 codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco coinvolto nella regolazione di programmi di espressione genica legati all’adattamento allo stress cellulare, incluse le reti trascrizionali responsabili dell’ipossia. È stato riportato che interagisce con gli output della segnalazione infiammatoria e dell’immunità innata, influenzando vie associate alle citochine e una più ampia riprogrammazione trascrizionale. Un’attività deregolata di ZNF395 è stata associata a un controllo alterato dello stato cellulare ed è stata studiata nel contesto della biologia tumorale e di altre condizioni in cui ipossia e infiammazione modellano fenotipi rilevanti per la malattia. In quanto proteina nucleare legante il DNA, ZNF395 rappresenta un nodo utile per analizzare i circuiti trascrizionali che governano proliferazione, sopravvivenza e risposte al microambiente.

ZNF395 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZNF395 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZNF395 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZNF395 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZNF395, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZNF395. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZNF395 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZNF395 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZNF395 nelle cellule tumorali con espressione di ZNF395 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.