ZBTB1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411630-ACT

ZBTB1 (zinc finger and BTB domain containing 1) codifica un regolatore trascrizionale che integra interazioni proteiche mediate dal dominio BTB/POZ con il legame al DNA tramite dita di zinco C2H2, contribuendo a modellare programmi di espressione genica specifici per linea cellulare e contesto. Nella biologia delle cellule ematopoietiche e immunitarie, ZBTB1 è implicato nel controllo di differenziamento, proliferazione e stabilità del genoma, collegando il controllo trascrizionale alla risposta al danno al DNA e al mantenimento degli stati della cromatina. Un’attività alterata di ZBTB1 può perturbare le reti regolatorie che governano lo sviluppo linfoide e le risposte allo stress, rendendolo rilevante per studi su fenotipi simili a immunodeficienza, disregolazione ematologica e circuiti trascrizionali oncogeni. In quanto fattore nucleare, ZBTB1 è spesso esplorato nella mappatura di vie coinvolte nella repressione/attivazione trascrizionale, nell’organizzazione della cromatina e nei processi associati ai checkpoint.

ZBTB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZBTB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZBTB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZBTB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZBTB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZBTB1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZBTB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZBTB1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZBTB1 nelle cellule tumorali con espressione di ZBTB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.