YTHDF2 Plasmide Double Nickase (h2): sc-416408-NIC-2
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- YTHDF2 Plasmide Double Nickase (h2) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il YTHDF2 Double Nickase Plasmid (h2) e il YTHDF2 Double Nickase Plasmid (h22) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira YTHDF2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
YTHDF2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416408-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’YTHDF2 umano codifica una proteina “reader” dell’m6A che si lega in modo selettivo agli mRNA modificati con N6-metiladenosina e ne promuove la degradazione, contribuendo così a modellare la stabilità dei trascritti e l’output traduttivo. Attraverso il reclutamento dei complessi di deadenilazione e dei macchinari di turnover dell’RNA, YTHDF2 partecipa alla regolazione post-trascrizionale in processi che includono le decisioni sul destino cellulare, le risposte allo stress e la segnalazione immunitaria. Un’attività di YTHDF2 deregolata è stata associata ad alterazioni del controllo epitranscrittomico in ambito oncologico, nell’infiammazione e in modelli di infezione virale, in cui variazioni nella rimozione degli mRNA possono rimodellare i programmi di espressione genica. L’editing del genoma di YTHDF2 supporta studi meccanicistici del metabolismo dell’RNA dipendente dall’m6A, la mappatura delle reti reader–bersaglio e l’analisi funzionale delle vie che regolano proliferazione, differenziamento e immunità innata.
YTHDF2 Il plasmide Double Nickase (h2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus YTHDF2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di YTHDF2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di YTHDF2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con YTHDF2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.