Wnt-10b CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-423710-ACT-2

マウスWnt10bは分泌性糖タンパク質Wnt-10bをコードしており、Frizzled/LRP受容体複合体を活性化してβカテニンの安定化とTCF/LEF依存的転写を促進するカノニカルWntリガンドである。Wnt-10bは、細胞運命決定、増殖、分化の制御を通じて、胚発生におけるパターニングおよび成体組織の恒常性を調節し、骨芽細胞形成、脂肪細胞分化の抑制、毛包および乳腺の生物学における役割がよく確立されている。Wnt10bシグナルの破綻は、骨量の変化、代謝・脂肪組織の表現型の変容、さらには状況依存的な腫瘍関連のWnt経路活性化と関連づけられており、Wnt/βカテニン動態の機構研究における有用な標的となる。マウス細胞やモデルにおけるWnt10bの遺伝子編集により、レポーターアッセイ、分化系、in vivo系譜解析などを用いて、リガンド特異的なWntシグナル伝達、経路間クロストーク、ならびに発生・代謝表現型の機能的解明が可能となる。

Wnt-10b CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Wnt10bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Wnt-10b CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Wnt10b 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はWnt10b転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Wnt-10bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のWnt10b遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるWnt-10b依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびWnt10b発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるWnt-10b経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。