VRK1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404617-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- VRK1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il VRK1 Double Nickase Plasmid (h) e il VRK1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira VRK1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: VRK1 Antibody (A-11): sc-271061
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
VRK1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404617-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
VRK1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404617-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La chinasi 1 correlata a Vaccinia (VRK1) è una chinasi serina/treonina che si localizza principalmente nel nucleo e regola la dinamica della cromatina, la progressione del ciclo cellulare e le risposte al danno al DNA. VRK1 fosforila substrati quali l’istone H3 e p53, collegandola all’ingresso in mitosi, al controllo trascrizionale e alle vie di segnalazione dei checkpoint che salvaguardano l’integrità del genoma. Attraverso la modulazione dell’involucro nucleare e di processi associati alla cromatina, VRK1 contribuisce a coordinare la proliferazione con lo stress replicativo e la riparazione. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di VRK1 sono state associate a fenotipi di tipo neurosviluppativo e neuromuscolare e la proteina è frequentemente studiata nel contesto della crescita cellulare aberrante e della stabilità genomica.
VRK1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus VRK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di VRK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di VRK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con VRK1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.