VAP-A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403093-ACT

VAPAは、小胞関連膜タンパク質関連タンパク質A（VAP-A）をコードしています。VAP-Aは小胞体（ER）に局在するアダプタータンパク質で、膜接触部位を編成し、脂質交換、小胞輸送、オルガネラ間コミュニケーションを協調的に制御します。VAP-AはFFATモチーフを持つパートナーと結合して、ホスホイノシチドおよびステロールの恒常性を調節し、ER–ゴルジ体輸送、エンドソーム動態、ER–ミトコンドリア間シグナル伝達を支えます。これらの過程を通じて、VAP-Aはプロテオスタシス、オートファジー、ストレス応答に影響を与え、細胞の代謝と生存を左右します。VAPAに関連する接触部位の生物学的機構の破綻は、脂質取り扱いの異常やERストレスを伴う神経変性疾患などとの関連が示唆されており、膜組織化の機構研究に有用な結節点（ノード）となります。

VAP-A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性VAPAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

VAP-A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における VAPA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVAPA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性VAP-Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVAPA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVAP-A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVAPA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVAP-A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。