USP32 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-433591-LAC

Mouse Usp32 codifica USP32, un enzima deubiquitinante che rimuove l’ubiquitina dalle proteine bersaglio per modularne stabilità, traffico intracellulare e output di segnalazione. Attraverso la regolazione della proteostasi dipendente dall’ubiquitina, USP32 è collegata a processi cellulari quali lo smistamento endosomiale, il controllo qualità delle proteine e vie di segnalazione sensibili allo stress che influenzano crescita e sopravvivenza cellulare. Alterazioni nelle dinamiche di deubiquitinazione sono state associate a una disregolazione della segnalazione infiammatoria e oncogenica in molteplici contesti biologici, rendendo Usp32 un nodo rilevante per studi meccanicistici sul controllo delle vie dell’ubiquitina. Nei sistemi murini, l’analisi della funzione di USP32 supporta la ricerca su come la deubiquitinazione rimodelli l’attività delle vie di segnalazione nello sviluppo, nell’immunità e nei fenotipi di modelli di malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale USP32 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Usp32 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale USP32 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Usp32, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di USP32. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Usp32 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.