USP22 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403660-ACT

USP22 (ubiquitin specific peptidase 22) è un enzima deubiquitinante che funge da componente regolatorio chiave del complesso coattivatore trascrizionale SAGA, nel quale rimuove l’ubiquitina dall’istone H2B per modulare l’accessibilità della cromatina e l’output trascrizionale. Attraverso il controllo epigenetico dell’espressione genica, USP22 influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e i programmi di differenziamento, integrando la segnalazione mediata dall’ubiquitina con la regolazione della trascrizione. Un’attività alterata di USP22 è stata associata a una deregolazione dei segnali proliferativi e a un rimodellamento trascrizionale osservati in molteplici contesti legati al cancro, supportandone l’impiego come punto di ingresso molecolare per lo studio delle reti oncogeniche di espressione genica. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di USP22 offre un meccanismo per interrogare come la deubiquitinazione degli istoni influenzi la trascrizione specifica di via e la proteostasi.

USP22 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di USP22 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

USP22 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus USP22 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione USP22, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di USP22. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus USP22 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da USP22 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via USP22 nelle cellule tumorali con espressione di USP22 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.