USP20 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406849-ACT

Il gene umano **USP20** codifica un enzima deubiquitinante (proteasi specifica per l’ubiquitina 20) che rimuove catene di ubiquitina dalle proteine bersaglio, modulandone stabilità, localizzazione e output di segnalazione. Attraverso la regolazione del turnover dipendente dall’ubiquitina, USP20 influenza processi tra cui il traffico dei recettori, la trasduzione dei segnali infiammatori e le vie di risposta allo stress che determinano crescita e sopravvivenza cellulare. In letteratura, alterazioni nelle dinamiche di deubiquitinazione che coinvolgono USP20 sono state associate a reti di segnalazione deregolate rilevanti per la trasformazione oncogenica, la regolazione immunitaria e la disfunzione metabolica, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della proteostasi. La caratterizzazione della funzione di USP20 può quindi aiutare a chiarire come l’editing dell’ubiquitina regoli ampiezza e durata delle vie di segnalazione nelle cellule umane.

USP20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di USP20 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

USP20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus USP20 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione USP20, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di USP20. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus USP20 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da USP20 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via USP20 nelle cellule tumorali con espressione di USP20 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.