ULBP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403663-ACT

ULBP2 (UL16 binding protein 2) è un ligando di NKG2D inducibile dallo stress, ancorato alla membrana tramite GPI, che promuove la sorveglianza immunitaria legandosi a NKG2D sulle cellule NK e sui linfociti T citotossici. La sua espressione è modulata da programmi di stress cellulare quali la risposta al danno del DNA, la segnalazione oncogenica e stimoli infiammatori, collegando ULBP2 a vie che controllano l’immunogenicità di superficie e il riconoscimento citolitico. Un’espressione e uno shedding (rilascio) disregolati di ULBP2 sono stati riportati in molteplici neoplasie e in contesti di infiammazione cronica e infezione, dove può influenzare l’evasione immunitaria e le soglie di attivazione delle cellule immunitarie. Di conseguenza, ULBP2 è ampiamente studiata come readout funzionale dello stress cellulare, delle interazioni tumore–sistema immunitario e dei meccanismi che regolano la segnalazione dell’asse NKG2D.

ULBP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ULBP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ULBP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ULBP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ULBP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ULBP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ULBP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ULBP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ULBP2 nelle cellule tumorali con espressione di ULBP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.