UDG Plasmide Double Nickase (h): sc-403189-NIC

Il gene umano **UNG** codifica la **uracil-DNA glicosilasi (UDG)**, un iniziatore chiave della riparazione per escissione di basi (base excision repair, BER) che rimuove l’uracile dal DNA derivante dalla deaminazione della citosina o dalla misincorporazione di dUTP. Generando siti abasici che vengono successivamente processati da endonucleasi AP, polimerasi e ligasi, UNG contribuisce a mantenere l’integrità del genoma durante la replicazione e la riparazione del DNA. L’attività di UNG si interseca anche con i processi di diversificazione degli anticorpi nelle cellule B, modulando l’elaborazione delle lesioni da uracile introdotte durante l’ipermutazione somatica e la ricombinazione di switch di classe. Una regolazione anomala del processamento dell’uracile e una compromissione della BER sono state associate a un aumento del carico mutazionale e a fenotipi di instabilità genomica rilevanti per la biologia del cancro e per modelli di danno al DNA associati all’infiammazione.

UDG Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus UNG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di UNG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di UNG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con UNG interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.