UCH-L1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401088-ACT

UCHL1 codifica a ubiquitina hidrolase C-terminal L1 (UCH-L1), uma enzima desubiquitinante enriquecida em neurónios que regula a homeostase da ubiquitina e a proteostase ao processar precursores de ubiquitina e ao reciclar ubiquitina a partir de substratos conjugados. Pelas suas funções no sistema ubiquitina–proteassoma e no controlo de qualidade proteica, a UCH-L1 influencia a função sináptica, a integridade axonal e as respostas celulares ao stress proteotóxico. Alterações na expressão ou atividade de UCHL1 têm sido associadas a processos neurodegenerativos, incluindo vias ligadas à agregação proteica e à vulnerabilidade neuronal, e também são estudadas em contextos de biologia tumoral e regulação do estado celular. Estas características tornam o UCHL1 um alvo útil para investigar sinalização dependente de ubiquitina, diferenciação neuronal e fenótipos de resposta ao stress em sistemas modelo humanos.

UCH-L1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UCHL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UCH-L1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UCHL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UCHL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UCH-L1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UCHL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UCH-L1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UCH-L1 em células tumorais com expressão de UCHL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.