U1 SnRNP 70 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401829-ACT

SNRNP70 codifica U1 SnRNP 70, un componente fondamentale della piccola ribonucleoproteina nucleare U1 (U1 snRNP) che riconosce i siti di splicing 5′ e avvia l’assemblaggio dello spliceosoma durante lo splicing del pre‑mRNA. Attraverso le sue interazioni con l’U1 snRNA e con ulteriori fattori dello spliceosoma, U1 SnRNP 70 contribuisce a una corretta definizione degli esoni, al processamento co‑trascrizionale dell’RNA e alla regolazione globale dei programmi di espressione genica. L’alterazione della funzione dello spliceosoma e la selezione modificata dei siti di splicing sono caratteristiche ricorrenti delle risposte cellulari allo stress e della riorganizzazione trascrizionale oncogena, rendendo SNRNP70 un nodo utile per lo studio del controllo del processamento dell’RNA. Pattern di splicing aberranti legati a perturbazioni dello spliceosoma sono rilevanti anche per la neurodegenerazione e per altre patologie in cui il metabolismo dell’RNA è compromesso, motivando studi meccanicistici delle vie associate a U1.

U1 SnRNP 70 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SNRNP70 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

U1 SnRNP 70 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SNRNP70 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SNRNP70, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di U1 SnRNP 70. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SNRNP70 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da U1 SnRNP 70 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via U1 SnRNP 70 nelle cellule tumorali con espressione di SNRNP70 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.