Type I 4-phosphatase Plasmide Double Nickase (h): sc-404750-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Type I 4-phosphatase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Type I 4-phosphatase Double Nickase Plasmid (h) e il Type I 4-phosphatase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira INPP4A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Type I 4-phosphatase Antibody (E-2): sc-390549
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Type I 4-phosphatase Plasmide Double Nickase (h) | sc-404750-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Type I 4-phosphatase Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404750-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INPP4A codifica la 4-fosfatasi di tipo I, una fosfatasi dei polifosfati dell’inositolo 4 che idrolizza il fosfatidilinositolo 3,4-bisfosfato in fosfatidilinositolo 3-fosfato, rimodellando i pool di fosfoinositidi di membrana. Attraverso questa attività modula la dinamica della segnalazione dipendente da PI3K, influenzando il reclutamento di effettori con dominio PH, l’identità delle membrane endosomiali e il controllo a valle dei programmi di crescita e sopravvivenza cellulare. La funzione di INPP4A interseca la segnalazione mediata da recettori e i processi di traffico vescicolare che coordinano il sensing dei nutrienti e le risposte allo stress. In letteratura, un’alterata regolazione di INPP4A e del turnover di PI(3,4)P2 è stata collegata a reti di segnalazione deregolate rilevanti per la biologia del cancro e per la neurobiologia, a supporto di studi meccanicistici sul rewiring delle vie di segnalazione.
Type I 4-phosphatase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus INPP4A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di INPP4A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di INPP4A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con INPP4A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.