Twinkle Plasmide Double Nickase (m): sc-432601-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Twinkle Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Twinkle Double Nickase Plasmid (m) e il Twinkle Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Twnk. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Twinkle Plasmide Double Nickase (m) | sc-432601-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Twnk** codifica **Twinkle**, un’elicasi del DNA mitocondriale essenziale per la replicazione e il mantenimento del mtDNA all’interno dei nucleoidi. Twinkle agisce insieme al replisoma mitocondriale per sostenere la fosforilazione ossidativa preservando il numero di copie e l’integrità del genoma mitocondriale, influenzando così il metabolismo energetico cellulare e l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno. L’alterazione dell’attività di **TWNK** è associata a deplezione del DNA mitocondriale e a fenotipi con delezioni multiple del mtDNA, rendendo questa via centrale negli studi sulla disfunzione mitocondriale nella biologia delle malattie neuromuscolari e neurodegenerative. **Twnk** è quindi un nodo ampiamente utilizzato per indagare la stabilità del genoma mitocondriale, le risposte allo stress replicativo e gli effetti a valle sulla biogenesi della catena respiratoria.
Twinkle Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Twnk nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Twnk. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Twnk. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Twnk interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.