Trx Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400746-ACT

Il gene umano **TXN** codifica la **tioredossina (Trx)**, un’ossidoreduttasi espressa in modo ubiquo che mantiene l’omeostasi redox cellulare catalizzando reazioni di scambio ditiolo–disolfuro e sostenendo i sistemi di difesa antiossidante. Trx interagisce con l’asse **tioredossina reduttasi/NADPH** e modula nodi di segnalazione sensibili allo stato redox che influenzano la regolazione trascrizionale, il ripiegamento proteico e l’apoptosi, inclusa la regolazione della segnalazione da stress mediata da **ASK1**. Attraverso il controllo delle specie reattive dell’ossigeno intracellulari e dello stato redox, **TXN** contribuisce a processi quali la proliferazione, la segnalazione infiammatoria e le risposte cellulari all’ipossia e al danno al DNA. Un’attività **TXN/Trx** deregolata è stata associata ad alterazioni nella gestione dello stress ossidativo e a fenotipi di segnalazione osservati in ambiti quali la biologia dei tumori, le disfunzioni metaboliche e i contesti neuroinfiammatori.

Trx Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TXN senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Trx Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TXN nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TXN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Trx. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TXN nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Trx nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Trx nelle cellule tumorali con espressione di TXN silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.