TRPM4 Plasmide Double Nickase (h): sc-402176-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRPM4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRPM4 Double Nickase Plasmid (h) e il TRPM4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TRPM4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRPM4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402176-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRPM4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402176-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRPM4 codifica un canale cationico monovalente attivato dal Ca2+ che conduce Na+ e K+ per depolarizzare la membrana plasmatica senza trasportare direttamente Ca2+. Modellando il potenziale di membrana, TRPM4 modula l’ingresso di Ca2+ attraverso altri canali e influenza la segnalazione a valle legata a eccitabilità, secrezione, regolazione del volume cellulare e attivazione delle cellule immunitarie. L’attività di TRPM4 interseca vie calcio-dipendenti, incluse la segnalazione guidata da PLC/IP3 e la regolazione di programmi trascrizionali dipendenti da NFAT. Una funzione disregolata di TRPM4 è stata implicata in disturbi della conduzione e del ritmo cardiaco, in processi neuroinfiammatori e in fenotipi associati al cancro, come alterazioni della migrazione e della proliferazione, supportandone l’impiego in studi meccanicistici della segnalazione dei canali ionici.
TRPM4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TRPM4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TRPM4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TRPM4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TRPM4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.