TRPC1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401040-NIC

TRPC1 (transient receptor potential cation channel subfamily C member 1) codifica un canale cationico della membrana plasmatica che contribuisce all’ingresso di Ca2+ mediato dal recettore e dipendente dalle riserve intracellulari (store-operated), modulando la dinamica del Ca2+ citosolico e la segnalazione a valle. L’influsso di Ca2+ dipendente da TRPC1 si integra con la segnalazione PLC/IP3, con l’accoppiamento STIM/ORAI e con vie regolate dal Ca2+ come MAPK e NFAT, influenzando proliferazione, migrazione e differenziamento cellulari. Nelle cellule umane, alterazioni dell’attività e dei pattern di espressione di TRPC1 sono state associate a una disregolazione dell’omeostasi del calcio osservata nel rimodellamento cardiovascolare, in processi neuropatici e in fenotipi di segnalazione correlati al cancro, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla funzione dei canali ionici e sulla trascrizione dipendente dal calcio.

TRPC1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TRPC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TRPC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TRPC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TRPC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.