Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TRP2/DCT Plasmide Double Nickase (h): sc-400334-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRP2/DCT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRP2/DCT Double Nickase Plasmid (h) e il TRP2/DCT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DCT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRP2/DCT Antibody (C-9): sc-74439
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRP2/DCT Plasmide Double Nickase (h) | sc-400334-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRP2/DCT Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400334-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La DCT umana (dopacromo tautomerasi), nota anche come TRP2, è un enzima melanosomiale della via biosintetica dell'eumelanina che catalizza la conversione del dopacromo in DHICA, contribuendo a determinare la composizione del pigmento e l'equilibrio redox nei melanociti. La sua espressione è regolata da programmi di linea melanocitaria, come la trascrizione dipendente da MITF, e si integra con i processi di biogenesi e traffico dei melanosomi. L'attività della DCT influenza le risposte cellulari allo stress ossidativo e gli stati di differenziamento, risultando quindi rilevante per gli studi sulla biologia della pigmentazione e sulla funzione dei melanociti. Un'espressione deregolata di DCT è spesso analizzata nel melanoma e in altri disturbi associati alle cellule pigmentarie come marcatore di identità di linea e di biologia tumorale.
TRP2/DCT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DCT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DCT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DCT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DCT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.