TRIM72 Plasmide Double Nickase (h): sc-403554-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRIM72 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRIM72 Double Nickase Plasmid (h) e il TRIM72 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TRIM72. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRIM72 Antibody (A-10): sc-514706
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRIM72 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403554-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRIM72 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403554-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRIM72 (nota anche come MG53) codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina con motivo tripartito, arricchita nel muscolo, che coordina la riparazione della membrana plasmatica e la proteostasi in risposta a danno meccanico o ossidativo. TRIM72 partecipa al traffico vescicolare e alla segnalazione indotta dal danno fungendo da piattaforma per l’assemblaggio di complessi di riparazione e modulando, in modo dipendente dall’ubiquitina, il turnover di componenti chiave, integrandosi con i processi di risposta allo stress e di rimodellamento di membrana. Nel muscolo striato e nei cardiomiociti, l’attività di TRIM72 influenza la resilienza cellulare regolando l’efficienza della riparazione e i segnali infiammatori e metabolici a valle. Un’espressione o una funzione disregolata di TRIM72 è stata associata a fenotipi di danno muscolare e a stati di stress cardiometabolico, rendendola rilevante per studi meccanicistici sull’integrità di membrana e sulla segnalazione da stress nelle cellule umane.
TRIM72 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TRIM72 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TRIM72. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TRIM72. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TRIM72 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.