Triadin Double Nickaseプラスミド (m): sc-429407-NIC

Trdnはトリアジン（triadin）をコードする遺伝子であり、横紋筋における興奮収縮連関を組織化する、接合部筋小胞体膜タンパク質である。トリアジンは、リアノジン受容体複合体をカルセクエストリンなどの筋小胞体内腔側Ca²⁺結合タンパク質と連結することで機能する。マウスの心筋細胞および骨格筋筋線維では、トリアジンが細胞内Ca²⁺の放出・再取り込みの速度特性を調整し、収縮力、不応期、ならびにCa²⁺恒常性に関わるシグナル伝達を規定する。さらに、筋小胞体の微小ドメイン構築における役割を介して、トリアジンは筋発生、ストレス応答、電気生理学的安定性を調節するCa²⁺依存性経路に影響を与える。TRDN機能の破綻は遺伝性不整脈の表現型やミオパチー様所見と関連しており、TrdnはCa²⁺ハンドリング異常や筋小胞体リモデリングのモデル化における重要な標的となる。

Triadin ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Trdn 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Trdn内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Trdnの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Trdnが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。