Triadin Plasmide Double Nickase (m): sc-429407-NIC

Trdn codifica la triadina, una proteina di membrana del reticolo sarcoplasmatico giunzionale che organizza l’accoppiamento eccitazione–contrazione nel muscolo striato collegando il complesso del recettore della rianodina a proteine luminali leganti il Ca²⁺, come la calsequestrina. Nei cardiomiociti e nelle miofibre scheletriche del topo, la triadina contribuisce a modulare la cinetica di rilascio e ricaptazione del Ca²⁺ intracellulare, che determina la forza contrattile, la refrattarietà e la segnalazione dell’omeostasi del Ca²⁺. Attraverso il suo ruolo nell’architettura dei microdomini del reticolo sarcoplasmatico, la triadina influenza vie Ca²⁺-dipendenti che regolano lo sviluppo muscolare, le risposte allo stress e la stabilità elettrofisiologica. L’alterazione della funzione di TRDN è associata a fenotipi aritmici ereditari e a caratteristiche miopatiche, rendendo Trdn un bersaglio rilevante per modellare difetti della gestione del Ca²⁺ e il rimodellamento del reticolo sarcoplasmatico.

Triadin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Trdn nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Trdn. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Trdn. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Trdn interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.