TRAF6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400117-ACT

TRAF6 (fattore associato al recettore del TNF 6) è una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING e una proteina adattatrice che trasduce segnali provenienti dai membri della superfamiglia dei recettori del TNF e dai recettori Toll-like/IL-1. Attraverso la poliubiquitinazione con legami K63 di sé stessa e di proteine partner, TRAF6 promuove l’attivazione di TAK1 e delle vie a valle NF-κB e MAPK, modulando l’espressione genica infiammatoria, le risposte immunitarie innate e i programmi di sopravvivenza cellulare. TRAF6 interagisce anche con la segnalazione PI3K–AKT e contribuisce alla differenziazione degli osteoclasti tramite la via RANK–RANKL, collegando la regolazione immunitaria al rimodellamento osseo. Una segnalazione di TRAF6 deregolata è stata associata a infiammazione cronica, disfunzioni immunitarie e attivazione di vie oncogeniche in molteplici contesti tumorali, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in studi focalizzati sulle vie di segnalazione.

TRAF6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TRAF6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TRAF6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TRAF6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TRAF6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TRAF6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TRAF6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TRAF6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TRAF6 nelle cellule tumorali con espressione di TRAF6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.