TORC3 Plasmide Double Nickase (h): sc-413035-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TORC3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TORC3 Double Nickase Plasmid (h) e il TORC3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CRTC3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TORC3 Antibody (A-12): sc-390712
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TORC3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-413035-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TORC3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-413035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRTC3 umano (TORC3) è un coattivatore trascrizionale regolato da CREB che integra la segnalazione dipendente da cAMP/PKA e quella dipendente dal calcio per modulare i programmi di espressione genica guidati da CREB. La sua attività è regolata dal sequestro citoplasmatico dipendente dalla fosforilazione e dalla traslocazione nucleare indotta dal segnale, collegando le vie chinasiche a monte agli output trascrizionali coinvolti nell’equilibrio energetico, nel metabolismo mitocondriale e nella regolazione di geni responsivi allo stress. CRTC3 contribuisce alla biologia di adipociti e melanociti ed è stato implicato in fenotipi metabolici alterati e in stati trascrizionali associati al melanoma, risultando quindi rilevante per analizzare la regolazione contestuale della via di CREB. Lo studio della funzione di TORC3 aiuta a chiarire come la segnalazione tramite secondi messaggeri rimodelli le reti trascrizionali in contesti metabolici e oncogenici.
TORC3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CRTC3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CRTC3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CRTC3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CRTC3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.