TORC3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-413035-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- TORC3 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- TORC3ダブルニカースプラスミド（h）およびTORC3ダブルニカースプラスミド（h2）は、CRTC3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: TORC3 抗体 (A-12): sc-390712
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
TORC3 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-413035-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TORC3 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-413035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒト CRTC3（TORC3）は、cAMP/PKA シグナルとカルシウム依存性シグナルを統合し、CREB によって駆動される遺伝子発現プログラムを調節する、CREB 制御性の転写コアクチベーターである。その活性は、リン酸化依存的な細胞質への隔離と、シグナル誘導性の核内移行によって制御されており、上流のキナーゼ経路と、エネルギーバランス、ミトコンドリア代謝、ストレス応答性遺伝子制御に関わる転写出力とを結び付けている。CRTC3 は脂肪細胞およびメラノサイトの生物学に寄与し、代謝表現型の変化やメラノーマ関連の転写状態にも関与することが示唆されているため、文脈依存的な CREB 経路制御を解明する上で重要である。TORC3 の機能を研究することは、セカンドメッセンジャーシグナルが代謝および腫瘍性の状況において転写ネットワークをどのように再編成するかを明らかにする助けとなる。
TORC3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CRTC3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CRTC3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CRTC3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CRTC3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。